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Search for: Amnion; Freeze-drying; Cryopreservation; Tissue preservation; Rabbits
Abstract
OBJETIVOS: Identificar vasos linfáticos em espécimes orbitários de cadáveres humanos através de microscopia óptica e análise imunohistoquímica.
MÉTODOS: Um estudo postmortem incluiu dez espécimes orbitários provenientes de dez cadáveres humanos. Todos os espécimes orbitários foram obtidos até 12 horas após a morte com uma técnica cirúrgica de exenteração orbitária e dissecados em glândula lacrimal, nervo óptico, gordura órbitária e músculos extraoculares. Para classificar como um vaso linfático, os critérios histológicos incluíram vasos endoteliais de parede única sem membrana basal bem desenvolvida, irregulares e lúmen sem hemácias, e os critérios imunohistoquímicos incluíram vasos endoteliais de parede única, com formato irregular e lúmen sem hemácias e reagentes a podoplanina D2-40.
RESULTADOS: As lâminas histológicas de glândula lacrimal, nervo óptico, tecido adiposo e músculos extraoculares reagiram positivamente a podoplanina D2-40.
CONCLUSÃO: Este estudo demonstrou vasos linfáticos na órbita humana, mais exatamente, na glândula lacrimal, no nervo óptico, na gordura orbitária e nos músculos extrínsecos extraoculares via microscopia óptica e imunohistoquímica.
Keywords: Vasos linfáticos; Órbita; Nervo óptico; Aparelho lacrimal; Músculos oculomotores; Tecido adiposo; Microscopia
Abstract
PURPOSE: To evaluate structural differences in amniotic membrane fragments subjected to different preservation techniques for potential ophthalmologic applications.
METHODS: Three placentas were collected from healthy donors, and four amniotic membrane fragments were prepared from each placenta. The fragments were divided into four groups with three samples each: cryopreserved, lyophilized, vacuum-dried using a vacuum concentrator, and fresh (control). After processing, the fragments were fixed, sectioned, and analyzed using scanning transmission electron microscopy to assess tissue morphology.
RESULTS: All samples met the established evaluation criteria. No morphological differences were observed among the groups. The structural characteristics of lyophilized and vacuum-dried membranes were comparable with those of cryopreserved and fresh membranes. However, vacuum drying demonstrated the greatest practicality for ophthalmologic use, as it allows membrane availability at any time and storage at room temperature.
CONCLUSION: Vacuum drying using a vacuum concentrator, lyophilization, and cryopreservation preserve the morphological characteristics of the human amniotic membrane similar to those of fresh tissue. A standardized protocol using a vacuum concentrator may be established owing to its advantages in storage convenience and accessibility.
Keywords: Amnion/transplantation; Cryopreservation/methods; Freeze drying; Lyophilization; Ophthalmologic surgical procedures; Regenerative medicine
Abstract
Objetivo: Avaliar a resposta tecidual e clínica a um implante orbitário de polimetilmetacrilato, oco e multiperfurado em sua porção posterior em modelo animal após evisceração.
Métodos: Dezesseis coelhos da raça Nova Zelândia foram submetidos à evisceração do globo ocular direito. Todos receberam implante oco de polimetilmetacrilato de 12 mm de diâmetro, multiperfurado em sua semiesfera posterior. O estudo foi dividido em avaliação clínica e histopatológica. A avaliação clínica foi diária até 14 dias pós-evisceração e, a cada sete dias, até completar 180 dias. Os animais foram divididos em grupos de quatro animais e cada um foi submetido à exenteração com 07, 30, 90 e 180 dias e depois à eutanásia. A análise histopatológica teve por fim caracterizar o padrão inflamatório, a estrutura do colágeno e o grau de neovascularização. Para isso, além da tradicional coloração pela hematoxilina-eosina, utilizou-se o corante Picrosirius Red (PSR) e imuno-histoquímica com o marcador CD 34.
Resultados: Não houve sinais de infecção, afinamento conjuntival ou escleral, exposição ou extrusão do implante em nenhum animal durante o estudo. Já no sétimo dia, o tecido neoformado migrou para dentro do implante formando uma rede fibrovascular através dos canais posteriores. A resposta inflamatória diminuiu ao longo do tempo avaliado e não foram encontradas células gigantes multinucleadas.
Conclusão: O implante analisado permite a sua integração aos tecidos orbitários pelo crescimento fibrovascular em seu interior. Os autores acreditam que este modelo de implante orbital pode fazer parte de testes com humanos.
Keywords: Implantes orbitários; Polimetilmetacrilato; Evisceração ocular; Anoftalmia; Procedimentos cirúrgicos oftalmológicos; Coelhos.
Abstract
PURPOSE: To assess the reliability and penetration depth of an automated micropuncture system using a tattoo machine.
METHODS: Twenty human corneas were obtained and subjected to intrastromal micropuncture using a tattoo machine. Each cornea was divided into two halves: one received pigment, while the other received saline solution as a control. The Cheyenne tattoo machine was operated at 60 Hz, with standardized needle exposure (six passes per application). The machine used cartridges containing five microneedles. The study was registered with Agência Nacional de Vigilância Sanitária ANVISA (numbers 80281110015, 80281110016, and 80281110019). The pigment used was Electric Ink black ink, with a density of 1,271,460 μg/mL. Puncture depth was measured before and after the procedure using both anterior segment optical coherence tomography and histopathological analysis. Puncture depth measurements were analyzed using ImageJ software. Each cornea was measured thrice, and the results were subsequently compared.
RESULTS: No corneal perforations were observed with the use of the tattoo machine, and puncture depth measurements ranged from 107 to 486 µm.
CONCLUSIONS: The use of a tattoo machine represents a viable and accessible approach for keratopigmentation, with potential for both cosmetic and therapeutic applications. Its adaptation for controlled intrastromal drug delivery may enable the targeted treatment of deep infectious keratitis, corneal neovascularization, and stromal inflammatory disorders, representing a promising approach for corneal stromal diseases. Further research is needed to optimize techniques and evaluate long-term safety and efficacy, particularly for the delivery of antimicrobial, anti-inflammatory, and anti-vascular endothelial growth factor agents.
Keywords: Eye banks; Cadaver; Cornea; Corneal stroma; Drug delivery systems; Tissue donors; Tattooing/instrumentation; Punctures
Abstract
Objetivos: Dimensionar o impacto da pandemia da COVID-19 nas doações e transplantes de córnea no Brasil e obter indicadores confiáveis para o embasamento de proposições de medidas efetivas para a manutenção e o aperfeiçoamento do sistema de obtenção, processamento, distribuição, utilização e controle dos tecidos oculares doados.
Métodos: Um questionário foi enviado, pelo escritório Brasil da Associação Pan-Americana de Bancos de Olhos (APABO), aos Bancos de Olhos brasileiros. Dados de janeiro a agosto de 2020 foram coletados para gerar indicadores confiáveis sobre o impacto da pandemia da COVID-19 nas doações e transplantes de córnea no Brasil.
Resultados: Dados de 37 Bancos de Olhos mostraram que 76,1% das 3.060 doações e 74,5% dos 3.167 transplantes aconteceram no período pré-pandemia. Das 6.052 córneas processadas 71,8% foram disponibilizadas para fins terapêuticos: 72,9% foram transplantadas, 26,1% acabaram sendo inviabilizadas (45% destas, classificadas para indicações ópticas) e 1%, em glicerina, permanecia em estoque. Das 1.706 córneas que não puderam ser disponibilizadas para uso terapêutico, 47,9% foram excluídas por fatores relacionados às condições dos tecidos, 43,6% por fatores sorológicos, 6,7% por contraindicações constatadas em histórico clínico após a captação e 1,8% por outros fatores.
Conclusões: O impacto negativo da pandemia nas doações e transplantes de córnea no Brasil se deveu à recomendação do Ministério da Saúde de suspender, por quase seis meses, as captações de doadores em parada cardiorrespiratória. Os indicadores tornam evidente a necessidade de atualização dos critérios de classificação e disponibilização das córneas pelos Bancos de Olhos e do sistema nacional de distribuição destes tecidos.
Keywords: Bancos de Olhos; Córnea; Doação de tecidos; Transplante de Córnea; COVID-19; Política pública; Brasil.
Abstract
OBJETIVOS: As características físico-químicas e o baixo custo da água de coco foram fundamentais para o este estudo. Analisar o uso de solução a base de água de coco como meio de conservação de córneas humanas em banco de olhos.
MÉTODOS: Estudo experimental e controlado realizado no Banco de Olhos do Hospital Geral de Fortaleza. Utilizou-se solução à base de água de coco preparada no laboratório de Tecnologia de Sêmen de Caprinos do Departamento de Medicina Veterinária da Universidade Estadual do Ceará. Foram usadas córneas de descartes divididas em dois grupos: G1 (Conservante com água de coco) - grupo experimental e G2 (grupo Conservante com OPTISOL GS®) grupo controle, em experimentos sequenciais. A osmolaridade do G1 foi analisada sequencialmente com 275, 300, 325, 345, 365 e 400 mOsm/L. A viabilidade das córneas foram realizadas por microscopia especular e biomicroscopia nos 1º, 3º e 7º dias.
RESULTADOS: As córneas em solução de 365 e 345 mOsm/L apresentavam transparência nos 8mm centrais até o 3º dia, com edema em toda periferia, dobras centrais e edema 2+, com perda parcial do epitélio até 7º dia, sendo o de maior osmolaridade com melhor transparência durante o seguimento. Grupo com 275, 300 e 400 mOsm/L, córnea opaca, edema difuso, perda total do epitélio no 3º dia. As córneas em Optisol mantiveram seus aspectos.
CONCLUSÕES: O conservante à base de água de coco manteve em parte a transparência corneana e a integridade epitelial, especialmente nos primeiros 3 dias de seguimento. A solução conservante com água de coco nas formulações utilizadas não se mostrou eficaz para o uso em banco de olhos humanos.
Keywords: Córnea; Água de coco; Preservação de órgãos/métodos; Solução para preservação de órgãos; Biotecnologia
Abstract
PURPOSE: Wet bio-amniotic membrane plugging combined with transplantation is a novel option that combined amniotic membrane plugging with amniotic membrane transplantation for the treatment of small corneal perforations. This study aimed to evaluate the efficacy of wet bio-amniotic membrane plugging in the treatment of small corneal perforations and compared it with that of the penetrating keratoplasty procedure.
METHODS: Forty patients (41 eyes) with small corneal perforations <3 mm in diameter treated at our hospital between July 2018 and January 2021 were retrospectively included. Among them, 21 eyes were treated with wet bio-amniotic membrane plugging (wet bio-amniotic membrane plugging group), and 20 eyes were treated with penetrating keratoplasty procedure (penetrating keratoplasty procedure group). The best-corrected visual acuity, anterior chamber formation, corneal thickness, primary disease control, postoperative complications, and graft survival rate were assessed.
RESULTS: No significant difference in baseline characteristics was found between the wet bio-amniotic membrane plugging and penetrating keratoplasty procedure groups (p>0.05). The postoperative control rates of primary diseases in the wet bio-amniotic membrane plugging and penetrating keratoplasty procedure groups were 95.2% and 90.0%, respectively (p=0.481). Visual acuity was improved 6 months after the operation in the wet bio-amniotic membrane plugging group and was improved at postoperative 1 month in the penetrating keratoplasty procedure group. The formation time of the anterior chamber in the wet bio-amniotic membrane plugging group was significantly shorter than that in the penetrating keratoplasty procedure group (p=0.023). The corneal thickness of the two groups significantly increased 12 months after the operation; however, the degree of thickening in the penetrating keratoplasty procedure group was higher than that in the wet bio-amniotic membrane plugging group (p<0.001). During the follow-up, postoperative complications were not different between the two groups (p>0.999).
CONCLUSION: The results suggest that wet bio-amniotic membrane plugging is effective and safe in the treatment of small corneal perforations. Thus, it can be used as an emergency treatment alternative to penetrating keratoplasty procedure for small corneal perforations.
Keywords: Amnion; Transplantation; Amniotic membrane; Keratoplasty, penetrating; Corneal perforation; Wet bio-amniotic membrane plugging; Wet bio-amniotic membrane transplantation
Abstract
PURPOSE: To evaluate the clinical results of cryopreserved amniotic membrane transplantation as a treatment option for refractory neurotrophic corneal ulcers.
METHODS: This prospective study included 11 eyes of 11 patients who underwent amniotic membrane transplantation for the treatment of refractory neurotrophic corneal ulcers at Hospital de Clínicas da Universidade Federal do Paraná, in the city of Curitiba, from May 2015 to July 2021. Patients underwent different surgical techniques in which the amniotic membrane was applied with the epithelium facing upward to promote corneal re-epithelialization.
RESULTS: The median age of the patients was 60 years (range, 34-82 years), and 64% were men. The predominant etiology of corneal ulcers was herpes zoster (45% of cases). Approximately one-third of the patients (27%) were chronically using hypotensive eye drops, and more than half (54%) had previously undergone penetrating corneal transplantation. At the time of amniotic membrane transplantation, 18% of the eyes had corneal melting, 9% had corneal perforation, and the others had corneal ulceration without other associated complications (73%). The time between clinical diagnosis and surgical treatment ranged from 9 days to 2 years. The corrected visual acuity was worse than 20/400 in 90% of the patients preoperatively, with improvement in 36% after 3 months of the procedure, worsening in 18% and remaining stable in 36%. Of the patients, 81% complained of preoperative pain, and 66% of them reported total symptom relief after the surgical procedure. In one month, 54.6% of the patients presented a closure of epithelial defect, and half of the total group evolved with corneal thinning. The failure rate was 45.5% of the cases.
CONCLUSION: Cryopreserved amniotic membrane transplantation can be considered a good alternative for treating refractory neurotrophic corneal ulcers, as it resulted in significant improvement in pain (66%) and complete epithelial closure (60%) in many patients at 1 month postoperatively. Notably, the high failure rate highlights the need for further studies to identify patient- and ulcer-related factors that may influence the outcomes of this procedure.
Keywords: Amnion/transplantation; Corneal ulcer; Anterior eye segment; Keratitis
Abstract
O presente trabalho traz uma revisão das abordagens terapêuticas para a cegueira da córnea. O estudo detalha as etapas e os elementos envolvidos na cicatrização da córnea. Ele mostra as limitações das estratégias cirúrgicas e farmacológicas usadas para restaurar e manter a transparência da córnea em termos de sobrevida a longo prazo e alcance geográfico. As perspectivas dos agentes anabólicos, incluindo vitamina A, hormônios, fatores de crescimento e novos moduladores pró-mitóticos e anti-inflamatórios para auxiliar a cicatrização da ferida na córnea, são revisadas criticamente. Aqui, apresentamos estudos envolvendo nanotecnologia, terapia gênica e reengenharia de tecidos como possíveis estratégias futuras para atuar de maneira isolada ou combinada com a cirurgia da córnea para prevenir ou reverter a cegueira corneana.
Keywords: Cegueira; Doenças da córnea; Transplante de córnea; Terapia genética; Terapia baseada em transplante de células e tecidos; Células-tronco
Abstract
Os bancos de olhos utilizam procedimentos estéreis na manipulação dos olhos, medidas antissépticas para a descontaminação da superfície ocular e critério rigoroso de seleção do doador. Essa seleção é feita por meio do prontuário médico e de testes sorológicos específicos post mortem. Para orientá-la e uniformizá-la, as associações de bancos de olhos e órgãos governamentais fornecem listas de contraindicações absolutas e relativas de uso do tecido, baseadas nas condições prévias de saúde do doador. Essas listas são as guardiãs do princípio de Hipócrates "primum non nocere" e, como tal, são conservadoras. Entretanto, cada transplante traz o risco de transmissão de agentes potencialmente nocivos ao receptor. O objetivo não é eliminar esse risco, mas limitá-lo a um nível razoável. Existe um equilíbrio entre a segurança e a disponibilidade de córneas. A sabedoria está em manter esse equilíbrio, exercendo a prudência sem rigor exagerado.
Keywords: Bancos de olhos/normas; Transplante de córnea; Seleção do doador; Coleta de tecidos e órgãos
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